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第九十四章 革兰氏染色法 浸出和压榨

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“还有成千上万种新的细菌,真菌,微生物等着你们去发现,还有你们已经习以为常的东西等着你们去重新认识。”

“魏嗣,你是分离和培养谷氨酸菌的,我现在教你一个办法,可以更好的分离革兰氏君,有了这种办法,分离菌种就会更高效。这个办法叫做革兰氏染色法。”

“革兰氏染色是用来鉴别细菌的一种方法,这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同,可将细菌分成两类,即革兰氏阳性与革兰氏阴性。”

“革兰氏染色方法是鉴别细菌种类的重要特性之一,不管是我们鉴别菌种,还是以后在医疗上鉴别病人所感染的细菌是什么类别的细菌,都有很大作用。”

“所以,这种方法你们务必要每个人都掌握,不得懈怠。”

“诺,先生。”

“革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,取菌种培养物涂片、干燥、固定。要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色。”

“涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性,然后用酒精灯的火焰轻微加热玻片,目的就是让涂层固定在涂抹位置,火焰固定不宜过热,过热就把细菌烫死了,以玻片不烫手为最好。”

“然后咱们加热草酸铵,草酸铵结晶紫染一分钟。草酸铵这个东西是木屑和火碱在240~250℃共熔,首先制取草酸盐,再经酸化即得草酸。草酸再与尿素反应可得草酸铵。”

“再用蒸馏水冲洗玻片,再加碘液覆盖涂面染约1分钟,而碘液可以用纶布碳化之后,加乙醇之后溶解,过滤的溶液便是碘液。”

“然后水洗,用吸去水分。加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。”

“最后加稀蕃红染色液染1分钟后,蒸馏水冲洗。干燥,镜检。”

“番红是从藏红花柱头中提取的一种天然染色剂,为橙红色粉末。是咱们以后植物组织实验中最常用的染色剂之一,你们要学会自己动手制作。可以用水浸泡熬煮藏红花柱头可得番红溶液,也可用酒精浸泡藏红花柱头研磨的粉制得。”

“其实这个原理很简单,通过初染和碘液媒染后,在细菌的细胞壁内形成了不溶于水的番红与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小。”

“再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把番红与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解。”

“薄而松散的肽聚糖网不能阻挡番红与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色,染色的差异主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。最后的结果就是革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。”

“以后你们一定要注意在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是染色过度,导致脱色不完全。”

“假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。”

“魏嗣,熊商,田因齐,赵语,韩康,赢疾,无疆。带领你们的师弟按照我说的方法,分头去制作碘液,草酸铵,蕃红等物。然后继续你们的试验。”

“诺,先生,可是何为细胞壁?先生,我们到现在也是一头雾水,完全不知啊,先生说的整个流程我们都听懂了,也知道要怎么干。”

“惟独这细菌的细胞壁。。。。。。”

咳咳咳。。。。。真是丢人啊,到底不是老师,怎么把这么重要的事情都忘了,他摸得给人上课居然连细菌的细胞结构都不给人讲清楚,这要是后世会不会被学生嘲笑?

不用问了,肯定会背嘲笑。

“那啥,细菌,真菌的组成有细胞膜,细胞质,细胞核。细菌和真菌的细胞质包括细胞质基质和细胞器;细菌无成型细胞核,其细胞核是由遗传物质聚集形成的拟核,拟核没有核膜及核仁。有些细菌还带有鞭毛。你们记住这些名字即可。”

“这个随着你们的观察你们自己就会发现,细胞壁类似于咱们的皮肤,细胞质就像肌肉,细胞核就像内脏。去做了,做好了一看便知。”

“诺,先生。”

学生们都退出去继续做他们的任务,而影墨,白冰,公子昂等人则留在了客厅之中。

“大哥,我还是想知道,我从脸上挂了一些东西做成了玻片,为何看到了是会动的虫子,真的很恶心啊。”

“额。。。。。兄弟,那是螨虫,人人都有,这个没办法的,所以咱们要惊颤清洗晾晒被褥,经常用香皂洗澡,勤换衣服。”

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